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提高臨床標(biāo)本中抗酸桿菌涂片陽(yáng)性率問(wèn)答

 

 

1、是什么原因造成抗酸染色假陽(yáng)性呢？脫色沒(méi)脫干凈嗎？

答：造成假陽(yáng)性的原因有：

①第一液加的量少，在染色期間出現(xiàn)干燥.

②沖完第一液后，未將水瀝干，脫色液加的量少，脫色時(shí)間短（一般脫色2分鐘），脫色不徹底.

③痰液中的食物殘?jiān)?/span>

 

2、我們用夾層杯，胸腹水和腦脊液要一定要NaOH處理嗎？

如果夾層杯制作的片子，脫色時(shí)沒(méi)有涂膜脫落現(xiàn)象，可以不用處理。

 

3、請(qǐng)問(wèn)所有離心操作都是加蓋離心嗎？所有離心管都是一次性的嗎？成本如何？

答：我們結(jié)核室所有離心都是低溫離心，所有離心管都是一次性尖底離心管，成本沒(méi)計(jì)算過(guò)。

 

4、老師提到蒸餾水最好要新鮮的，新鮮蒸餾水如何獲得呢？滅菌后放置一段時(shí)間的可以嗎？

答：新鮮蒸餾水可以從生化制水機(jī)中取，滅菌后放置冰箱可以。

 

5、請(qǐng)問(wèn)老師，多次離心，會(huì)增加感染的機(jī)會(huì)嗎？

答：是的，可以考慮購(gòu)買帶安全罩的低溫離心機(jī)

 

6、我們用的也是消化離心夾層杯法，試劑商說(shuō)NaOH能殺死抗酸菌。對(duì)此我表示懷疑，然后做了三次試驗(yàn)，將消化后的標(biāo)本去培養(yǎng)，其中有兩次是培養(yǎng)陰性，一次培養(yǎng)陽(yáng)性。所以，我想知道NAOH到底能不能殺死抗酸菌？

答：能殺死20%-90%的分枝桿菌

 

7、老師，你們痰標(biāo)本陽(yáng)性率很高了。標(biāo)本合格率怎么樣；數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)按人次，還是標(biāo)本次數(shù)； 還有就是剛才老師提到及時(shí)痰、夜間痰和晨痰，這3類標(biāo)本哪種陽(yáng)性率高?

答：標(biāo)本合格率沒(méi)統(tǒng)計(jì)過(guò)，最開(kāi)始開(kāi)展結(jié)核檢查時(shí)，標(biāo)本質(zhì)量挺好的，后來(lái)質(zhì)量有所下降，我最初是將做病理、做一般菌檢測(cè)的標(biāo)本都收集過(guò)來(lái)，做涂片或培養(yǎng)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)是按人次，有時(shí)，一個(gè)病人可能會(huì)做2-3次涂片，有一張陽(yáng)性我們就按陽(yáng)性處理。文獻(xiàn)說(shuō)晨痰陽(yáng)性率高。

 

8、沒(méi)有NaOH，用KOH可以嗎，濃度也一樣嗎?胸腹水加抗凝劑是否會(huì)影響培養(yǎng)?還是說(shuō)加抗凝劑僅用于結(jié)核涂片

答：文獻(xiàn)中均為NaOH消化，我們沒(méi)試過(guò)KOH消化，可以試試看。加抗凝劑是否會(huì)影響培養(yǎng)，肝素和SPS抗凝不影響培養(yǎng)，EDTA抗凝會(huì)影響培養(yǎng)。

 

9、請(qǐng)問(wèn)痰液所用離心管是哪種類型？

答：50ml尖底離心管。BD和拱東均有售。

 

10、老師您好！我想問(wèn)：1您提用晨尿可以提高陽(yáng)性率，但在菌量少的情況下，是不是像書(shū)里留24小時(shí)的尿，但沒(méi)有防腐有影響嗎？2肝素抗凝的標(biāo)本有影響一般細(xì)菌培養(yǎng)？（因?yàn)槲覀冏鲆话慵?xì)菌培養(yǎng)還要做涂片，醫(yī)生送一管無(wú)菌管的給我們

答：涂片可以使用24小時(shí)尿液，但要注意冷藏和無(wú)菌操作，不要加防腐劑。肝素和SPS抗凝不會(huì)影響一般菌培養(yǎng)。

 

11、水洗標(biāo)本時(shí)蒸餾水用40到50ml，用什么容器離心！我們就是一般離心機(jī)，怎么用？

答：可以先將標(biāo)本倒入15ml尖底離心管，如果標(biāo)本量多時(shí)，可用多個(gè)離心管離心，離心后，去上清，集中到一管，再用蒸餾水加至15ml洗，混勻，離心，去上清，加3滴蒸餾水混勻涂片。

 

12、請(qǐng)問(wèn)老師有沒(méi)有做過(guò)細(xì)胞離心機(jī)對(duì)提高腦脊液結(jié)核桿菌檢出率的影響？

答：沒(méi)做過(guò)

 

13、我們實(shí)驗(yàn)室的就有許多小離心機(jī)，上面的數(shù)值都可以達(dá)到3800g，可信嗎？

答：這個(gè)問(wèn)題可以咨詢廠商，我們用的是可以放50ml尖底離心管的進(jìn)口低溫離心機(jī)。

 

14、請(qǐng)教各位老師，你們化痰劑消化痰消化多長(zhǎng)時(shí)間？

答：我們一般為5-10分鐘左右。

 

15、請(qǐng)教老師化痰劑哪家生產(chǎn)？

答：有珠海貝索、濟(jì)南博萊等廠家。

 

16、抗酸桿菌的室內(nèi)質(zhì)控怎么做？

答①自查和互查：抽查復(fù)檢當(dāng)日10%涂片，并做登記。要求：抗酸桿菌陽(yáng)性片符合率≥98%，陰性片符合率≥96%，不允許1+以上的陽(yáng)性片出現(xiàn)假陰性。

②涂片脫落面積應(yīng)在10%以下。

 ③抗酸染色每天染自制的陽(yáng)性和陰性質(zhì)控片，熒光染色每批次均要染自制的陽(yáng)性和陰性質(zhì)控片，監(jiān)測(cè)染液質(zhì)量和染色效果合格。

 

17、老師，你們陽(yáng)性率好驚人！我們用的是濃縮消化離心夾層杯法，平均每天30個(gè)左右的痰標(biāo)本，陽(yáng)性率是30左右。請(qǐng)問(wèn)你們的痰標(biāo)本是多少呢？

答：我們每天涂片量平均在50-70張，標(biāo)本種類比較復(fù)雜：膿、體液、糞便、灌洗液、拭子等。

 

18、請(qǐng)問(wèn)，直接涂片法玻片在生物安全柜紫外燈照射1小時(shí)可以把結(jié)核桿菌殺死嗎？在基層醫(yī)院，工作量大，人員不足的情況下，如何做到自身保護(hù)？需要注意哪些問(wèn)題

答：①不能殺死，在自然條件下結(jié)核桿菌在室內(nèi)陰暗潮濕處能存活半年;在干燥的痰中于陰暗處可存活6～8 個(gè)月;在隨塵土飛揚(yáng)的空氣中可保持傳染性8～10d;在污染的圖書(shū)上可存活3 個(gè)月;3℃條件下存活1 年,-6～-8℃環(huán)境下可存活4～5 年。結(jié)核分枝桿菌對(duì)環(huán)境理化因子抵抗力比一般細(xì)菌繁殖體強(qiáng)。對(duì)濕熱敏感，65℃加熱30 分鐘或80℃以上加熱5 分鐘就可以將其殺滅，痰標(biāo)本中結(jié)核菌需在100℃煮沸5 分鐘才可殺滅。結(jié)核分枝桿菌對(duì)干燥和干熱耐力較強(qiáng)，在干燥痰中可存活數(shù)周。干熱180℃作用2h 可達(dá)到殺菌目的,殺滅痰中的結(jié)核桿菌則需3h 以上。結(jié)核分枝桿菌對(duì)紫外線敏感，日光照射2 小時(shí)以上可殺滅暴露在物體上的細(xì)菌，紫外線燈照射可殺滅物體表面和空氣中結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核分枝桿菌對(duì)多數(shù)化學(xué)消毒劑比較敏感，75％酒精作用5 分鐘即可將其殺滅；5％的苯酚或來(lái)蘇兒均可在５分鐘內(nèi)將其殺滅；1000mg/L  CH3COOOH 作用２小時(shí)可殺滅尿液內(nèi)和痰中的結(jié)核分枝桿菌。

②標(biāo)本處理、結(jié)核菌涂片染色、培養(yǎng)和藥物敏感實(shí)驗(yàn)、免疫血清學(xué)檢查等檢測(cè)可在生物安全II級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

③實(shí)驗(yàn)室配置生物安全柜、低溫冷凍離心機(jī)、N95口罩、一次性防護(hù)衣、一次性鞋套、一次性帽子、最好配備負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室。不要邊加熱邊涂片，涂片自然干燥后固定染色。

 

19、結(jié)核桿菌抗酸染色陽(yáng)性，弱抗酸是陽(yáng)性嗎？

答：結(jié)核桿菌弱抗酸是陽(yáng)性。

 

20、老師，你提到的血漿，如果血常規(guī)的血標(biāo)本經(jīng)過(guò)離心后得到的血漿可以用嗎？

答：如果用患者血漿，1:15稀釋后做涂片，如果抗酸桿菌鏡檢陰性，可以使用。

 

21、溶痰劑需滅菌嗎？

答：不需要，它本身有消毒作用。

 

22、請(qǐng)問(wèn)，溶痰劑可以用84液配置嗎？

答：84里面穩(wěn)定劑等添加劑多，最好購(gòu)買商品化的溶痰劑。

 

23、老師，紫外燈照射玻片的距離1米和0.5米的滅菌效果有沒(méi)有區(qū)別？

答：沒(méi)研究過(guò)

 

24、老師，對(duì)于骨與關(guān)節(jié)結(jié)核感染臨床診斷非常困難，我們實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常收到關(guān)節(jié)液或術(shù)中組織，老師在這兩種標(biāo)本結(jié)核菌涂片方面有什么經(jīng)驗(yàn)方法可以提高陽(yáng)性率的？

答：關(guān)節(jié)液如果不是膿性，可以參照胸腹水涂片方法；如果是膿性，用2%-4%的氫氧化鈉消化，再用蒸餾水或PBS稀釋堿性，離心，去上清，加3滴蒸餾水混勻涂片，切記涂片要薄。如果是組織，可以用剪刀剪碎，再用2%-4%的氫氧化鈉消化，消化時(shí)間1小時(shí)左右，后續(xù)操作同膿。記住剪刀用后要用酒精消毒，流水多沖洗幾遍，防止交叉污染。

 

25、請(qǐng)問(wèn)老師，就是血漿用生化，或者血常規(guī)的都可以嗎，另外你們的抗酸染色用儀器和手工染色兩者陽(yáng)性率有區(qū)別嗎？

答：血漿建議用血庫(kù)獻(xiàn)血者的血漿，我們涂片曾經(jīng)做過(guò)患者的血液抗酸桿菌涂片1+的結(jié)果，如果用患者血漿，稀釋后做涂片，如果抗酸桿菌鏡檢陰性，可以使用。

儀器染色和手工染色沒(méi)比對(duì)過(guò)，我們是偶爾使用儀器染色，出現(xiàn)過(guò)涂膜脫落現(xiàn)象。

 

26、請(qǐng)問(wèn)自動(dòng)染色儀加熱到50度與火焰固定效果有差別嗎?

答：我們是沒(méi)試過(guò)，可以一份標(biāo)本涂?jī)蓮?，試試看?/span>